### 背景概述

T7 RNA聚合酶是一种在T7噬菌体中发现的99kDa单亚基蛋白，属于依赖DNA的RNA聚合酶，并由T7噬菌体编码。其主要功能是执行转录活性，且无需任何其他辅助转录因子。与细菌RNA聚合酶相比，T7 RNA聚合酶对识别序列的特异性更高，转录效率也显著提高。由于其高活性和高保真度，T7 RNA聚合酶非常适合用于体外RNA的合成，在科研和商业开发中得到了广泛应用。

在mRNA药物的生产流程中，涉及基因合成、质粒DNA发酵、纯化、mRNA合成、纯化以及LNP包封和分装等多个环节。mRNA合成过程以线性化质粒DNA为模板，利用T7 RNA聚合酶进行一系列酶促反应。在IVT过程中，RNA聚合酶负责从DNA模板转录RNA。然而，T7 RNA聚合酶的残留可能成为mRNA成品中的一种工艺相关杂质。它可能通过LNP包封进入细胞并释放，视为外源抗原，可能与中和抗体结合，诱导促炎细胞因子的产生，进而影响mRNA的稳定性。因此，对其残留进行有效评估至关重要，以确保最终产品的质量和安全性。

### 相关法律规定

根据CDE发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》，明确要求对生产工艺步骤进行质量控制和检测，包括加帽率、Poly(A)尾的长度、mRNA序列的完整性以及准确性、纯度和浓度等项目。对于工艺中的残留蛋白质，目前可通过使用nanoorange染料检测总蛋白含量。这是一种新型荧光染料，其工作原理是通过与蛋白质结合后增强其荧光信号。然而，这种方法的结果包括了IVT原液中所有类型的蛋白质残留，诸如内切酶、无机焦磷酸酶及T7 RNA聚合酶等。

在mRNA药物工艺中，T7 RNA聚合酶是核心酶之一，精确监测其残留情况能够有效控制mRNA生产过程的质量。美国药典（USP）最近发布的《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》中指出，应对生产工艺相关杂质进行检测，特别是针对主要杂质的监测，包括dsRNA残留、DNA模板残留以及T7 RNA聚合酶残留等。这一法规首次对单一酶蛋白残留杂质提出了明确要求，从而加强了对mRNA药物生产过程中杂质的监管。

### MILE米乐的检测技术

为满足《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》的要求，强大的MILE米乐团队自主研发了T7 RNA聚合酶残留检测试剂盒（ELISA法）。该试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法，可以有效检测T7 RNA聚合酶的残留量，从而实现对工艺杂质的深入分析。

#### 检测流程与特色

产品操作简单，一次加样和洗板即可完成显色，整个检测过程仅需1小时15分钟。MILE米乐的试剂盒标准曲线线性良好，检出限低于0.1ng/ml，定量限可达到0.25ng/ml，其重复性和准确度均优异。此外，该试剂盒仅特异性识别T7 RNA聚合酶，不受其他IVT工具酶的干扰，适配性广泛，兼容市场上大多数T7 RNA聚合酶。

通过MILE米乐的检测技术，用户可以获得不同工艺阶段mRNA样本中T7 RNA聚合酶的残留量，从而更好地提升mRNA药物生产的品质和安全性。欲了解更多信息或进行产品订购，请访问MILE米乐的官方网站。