通过体外转录（IVT）获得的mRNA，其反应混合物中不仅含有所需的mRNA产物，还混合有蛋白质（如T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶）、核苷三磷酸（NTP）、模板DNA、盐离子以及IVT过程中产生的mRNA副产物（如双链RNA、截断RNA片段）等杂质。这些杂质的存在可能对mRNA的功能带来负面影响，例如影响其准确定量、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，必须通过纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中分离，确保其纯度和完整性，以保障产品的安全性和有效性。常见的mRNA纯化方式包括氯化锂（LiCl）沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。

在这些方法中，沉淀法、磁珠法和硅胶柱法操作相对简单快捷，但适合的纯化量较小，效率有限，因此多应用于科研和早期开发阶段。在工业生产中，层析纯化成为主要的纯化方法。

氯化锂沉淀法

氯化锂（LiCl）沉淀是一种传统的mRNA纯化方法，其原理在于锂离子能在特定pH条件下减少RNA分子之间的相斥作用，从而促进RNA的聚集和沉淀。通过离心分离，能够获得较为纯净的RNA样品。然而，在工业生产中，由于残余锂盐可能存在毒性，以及对RNA的低温沉淀需求，这种方法在生产规模放大时可能导致较高的能耗及设备要求。

硫酸铵沉淀法

据2024年1月中科院过程工程研究所张松平团队的研究，硫酸铵在室温下对RNA的纯化效果显著。研究表明，当硫酸铵浓度达到18M时，mRNA的沉淀率超过95%。最佳的沉淀条件建议为2M硫酸铵，pH7.0，温度20℃以及沉淀时间2小时，能够实现近100%的沉淀率和溶出率。

硅胶柱膜纯化

硅胶柱膜纯化是基于硅胶膜表面硅醇基团与mRNA分子之间的相互作用，能够有效分离mRNA与蛋白质、多糖、脂类等杂质。该方法因其高效和简便而广泛应用于实验室和早期研究阶段，为研究人员提供了可靠的mRNA纯化手段。

磁珠法

磁珠法利用修饰的氧化铁磁珠颗粒与mRNA结合，并在磁场的作用下实现纯化。磁珠表面所带的官能团能够与mRNA分子特异性结合，从而实现选择性富集。尽管该方法在理论上能够更高效地去除杂质，但在实际应用中须注意磁珠储存和使用条件对mRNA完整性可能产生的负面影响。

层析法

MILE米乐采用层析法进行工业级mRNA纯化，能够获得更高的核酸质量，并满足大规模生产的需求。Oligo(dT)亲和色谱作为主流方法，与其他精纯手段（如疏水层析、阴离子层析）联用，有效提升了纯化效率。

整体而言，MILE米乐致力于发展高效、可靠的mRNA纯化技术，以支持新药的研发和mRNA疫苗的生产需求。在具体的工艺开发过程中，依据mRNA的特性调整相关参数，以优化最终的产品质量。

MILE米乐提供全套mRNA疫苗及相关药物的高性能酶原料、化学底物、IVT试剂盒，并拥有自主质粒制备、IVT工艺开发、mRNA纯化及质检平台，为客户提供全面的解决方案，助力快速推进新药开发。