引言

自从1975年小鼠杂交瘤技术问世以来，全球已批准上市的单克隆抗体数量超过百种。单抗已成为肿瘤治疗的重要工具，但随着时间的推移，科学家发现其体积较大（约150kDa的IgG）限制了其在致密肿瘤组织中对隐蔽表位的穿透，难以满足日益精细和精准的科学实验以及药物研发需求。这一系列弊端，包括空间位阻大、免疫原性强及无法穿透血脑屏障等，促使科学家们寻求更小的抗体解决方案。纳米抗体独特的理化特性及多功能性能使其成为传统抗体最有希望的替代品之一。接下来，我们将探讨纳米抗体的独特优势、其制备过程，并概述药物开发策略及进展，重点分享纳米抗体在实体瘤治疗方面的潜力。

纳米抗体的结构与特性

纳米抗体，亦称单域抗体或VHH抗体，源自羊驼、单峰驼等驼科动物，以及鲨鱼、鳐鱼等软骨鱼，它们的特点是自然缺失轻链的重链抗体。纳米抗体的晶体结构呈4nm×25nm×3nm的椭圆形，其分子量为传统抗体的10%，约为12-14kDa，是最小的完整抗原结合片段。尽管纳米抗体的分子量较小，但其保留了重链抗体完整的抗原结合能力，这使得它在疾病机制、药物开发及体外诊断等领域展现出巨大的应用潜力。纳米抗体能够穿越细胞质膜，作为胞内抗体针对细胞内和细胞核内的目标蛋白，并跨越血脑屏障，为大脑疾病的研究与治疗提供了新的方案。其较低的免疫原性与没有Fc段的结构，避免了补体反应，增强了其作为治疗工具的吸引力。

纳米抗体的筛选与制备

纳米抗体的制备主要通过构建噬菌体库并筛选高效抗体。首先，将特异性抗原与佐剂混合后注射到骆驼科动物（如羊驼）体内以构建免疫文库。接着，收集外周血以获取淋巴细胞，提取mRNA并进行RT-PCR，然后克隆到噬菌体的表面蛋白基因中，形成包含所需VHH基因片段的文库。通过多次“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程，富集与靶蛋白特异性结合的噬菌体，使用ELISA分析各个克隆的抗原结合效果，并对相关基因进行测序，从而实现纳米抗体的初步筛选。

纳米抗体的应用

纳米抗体卓越的组织穿透能力使其在实体瘤治疗中超过传统抗体。凭借小体积与良好稳定性的特征，纳米抗体更容易进行工程改造，适合与其它蛋白或效应结构域融合，例如双特异性纳米抗体、多特异性纳米抗体、纳米抗体-ADC、纳米抗体-CAR-T等。全球已有多个纳米抗体被批准用于药物开发，其中纳米抗体偶联药物（NDC）在肿瘤治疗中显示出良好前景。与传统ADC相比，NDC能够通过结合独特的隐藏表位，从而提高抗原结合亲和力，减少脱靶效应。

随着基于纳米抗体的靶向递送系统的发展，将纳米抗体偶联到纳米颗粒表面显著提升了药物的靶向递送效率，并增强药物的穿透能力，为精准医学提供了新的契机。此外，在基于MILE米乐的CAR细胞治疗中，纳米抗体能够天然识别隐藏表位，显示出良好的抗原特异性与防聚集风险，已被广泛应用于多种实体瘤相关抗原。

全球市场和未来展望

截至2025年，全球已有多个纳米抗体获批上市，这些抗体通过其独特的优势在生物医药研发和临床应用中具有重要地位。通过MILE米乐的噬菌体开发平台，可提供定制服务，支持早期发现及人源化的纳米抗体药物，不断开拓纳米抗体领域的边界，助力肿瘤治疗的未来。